Annexin V/PI檢測服務(wù)

服務(wù)項(xiàng)目簡介

在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。

Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合

。因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，膜磷脂酰絲氨酸外翻的發(fā)生早于細(xì)胞核的變化，而

此時(shí)Propidium Iodide（PI）不能通過細(xì)胞膜。

細(xì)胞壞死時(shí)，雖然也會(huì)發(fā)生磷脂酰絲氨酸外翻，但此時(shí)細(xì)胞膜的通透性明顯增加，PI等核酸染料進(jìn)入細(xì)胞與細(xì)胞核中的核酸結(jié)合，

發(fā)出紅色熒光。所以Annexin V-FITC(綠色熒光)常與鑒定細(xì)胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，來區(qū)分凋亡細(xì)胞與死亡細(xì)胞。

技術(shù)原理及步驟

1. 離心收集細(xì)胞，微量離心機(jī)轉(zhuǎn)速1000 rpm，離心時(shí)間5 min，棄培養(yǎng)基。

2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。

3. 用400 μL1× Binding Buffer懸浮細(xì)胞，濃度大約為1×106 cells/mL。

4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5 μlLAnnexin V-FITC，輕輕混勻后于2~8°C避光條件下孵育15min。

5. 加入10 μL PI后輕輕混勻于2~8°C避光條件下孵育5 min。

6. 在1小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。

應(yīng)用實(shí)例

應(yīng)用領(lǐng)域

細(xì)胞的早期凋亡及區(qū)分凋亡與壞死細(xì)胞

服務(wù)周期

我公司在正式接受實(shí)驗(yàn)委托2個(gè)星期左右完成實(shí)驗(yàn)并提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

客戶須知（對材料的要求、注意事項(xiàng)）

需提供細(xì)胞類型，處理?xiàng)l件。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持