在不限制性消化的情況下產(chǎn)生無(wú)縫質(zhì)粒DNA或BAC克隆

Gibson組裝過(guò)程從設(shè)計(jì)末端重疊20-40bp的dsDNA片段開(kāi)始。對(duì)于Gibson Assembly HiFi 1步反應(yīng)，這些DNA片段與2X Gibson Assembly?HiFi 1步主混合物結(jié)合并孵化。在這段時(shí)間內(nèi)，互補(bǔ)端被生成、退火和密封。這個(gè)一步恒溫過(guò)程可以在不到60分鐘的時(shí)間內(nèi)完成，并產(chǎn)生一個(gè)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化準(zhǔn)備好的、雙鏈、完全連接的DNA結(jié)構(gòu)。

GA 1步主混合物（2X）包含一種酶和試劑的專(zhuān)有混合物，優(yōu)化后可促進(jìn)雙標(biāo)準(zhǔn)DNA片段的一步組裝。該mastermix包括一個(gè)校對(duì)多聚酶，它介導(dǎo)連接修復(fù)，以低連接錯(cuò)誤率和高序列保真度得到組裝結(jié)構(gòu)。GA陽(yáng)性對(duì)照（2X）足以進(jìn)行2個(gè)反應(yīng)（5和10個(gè)反應(yīng)試劑盒）或5個(gè)反應(yīng)（50個(gè)反應(yīng)試劑盒）。該對(duì)照品由10ng 1.5kb插入物和30ng含有氨芐西林抗性基因的2.7kb載體組成。4.2 kb組裝結(jié)構(gòu)的選擇可以使用含有100μg/ml氨芐西林、0.1 mM IPTG和40μg/ml X-Gal的LB瓊脂板進(jìn)行。[Gibson組裝方法允許在幾乎任何載體中插入一個(gè)或多

在不限制性消化的情況下產(chǎn)生無(wú)縫質(zhì)粒DNA或BAC克隆

Gibson組裝過(guò)程從設(shè)計(jì)末端重疊20-40bp的dsDNA片段開(kāi)始。對(duì)于Gibson Assembly HiFi 1步反應(yīng)，這些DNA片段與2X Gibson Assembly?HiFi 1步主混合物結(jié)合并孵化。在這段時(shí)間內(nèi)，互補(bǔ)端被生成、退火和密封。這個(gè)一步恒溫過(guò)程可以在不到60分鐘的時(shí)間內(nèi)完成，并產(chǎn)生一個(gè)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化準(zhǔn)備好的、雙鏈、完全連接的DNA結(jié)構(gòu)。

GA 1步主混合物（2X）包含一種酶和試劑的專(zhuān)有混合物，優(yōu)化后可促進(jìn)雙標(biāo)準(zhǔn)DNA片段的一步組裝。該mastermix包括一個(gè)校對(duì)多聚酶，它介導(dǎo)連接修復(fù)，以低連接錯(cuò)誤率和高序列保真度得到組裝結(jié)構(gòu)。GA陽(yáng)性對(duì)照（2X）足以進(jìn)行2個(gè)反應(yīng)（5和10個(gè)反應(yīng)試劑盒）或5個(gè)反應(yīng)（50個(gè)反應(yīng)試劑盒）。該對(duì)照品由10ng 1.5kb插入物和30ng含有氨芐西林抗性基因的2.7kb載體組成。4.2 kb組裝結(jié)構(gòu)的選擇可以使用含有100μg/ml氨芐西林、0.1 mM IPTG和40μg/ml X-Gal的LB瓊脂板進(jìn)行。[Gibson組裝方法允許在幾乎任何載體中插入一個(gè)或多個(gè)線性雙鏈DNA片段，而無(wú)需依賴兼容的限制性位點(diǎn)。Gibson組裝法明顯快于傳統(tǒng)的基于限制性內(nèi)切酶消化的克隆法，并被證明可以同時(shí)克隆小片段和大片段的雙鏈DNA。使用Gibson Assembly?HiFi一步法試劑盒，可以在一個(gè)試管中一步完成一到五個(gè)大小在500 bp到32kb之間的插入物的同時(shí)克隆，使用一個(gè)穩(wěn)健的等溫反應(yīng)，克隆效率可超過(guò)90%。

訂購(gòu)信息：提供5、10或50個(gè)反應(yīng)的套件。所有試劑盒均包含一瓶GA一步混合（2X）和一瓶GA陽(yáng)性對(duì)照（2X）以及詳細(xì)的使用手冊(cè)。