在不限制性消化的情況下產(chǎn)生無縫質(zhì)粒DNA或BAC克隆

Gibson組裝過程從設(shè)計末端重疊20-40bp的dsDNA片段開始。對于Gibson組裝超反應(yīng)，采用了兩步工藝。首先，DNA片段與2X Gibson Assembly?Ultra Master Mix a.結(jié)合，孵化產(chǎn)生重疊的自由端。酶失活后，反應(yīng)緩慢冷卻至退火重疊端。接下來，添加2X Gibson Assembly?Ultra Master Mix B，以便生成完全密封的結(jié)構(gòu)。這種高效和穩(wěn)健的克隆方法大約需要80分鐘，并產(chǎn)生一個轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化準備，雙鏈，完全連接的DNA結(jié)構(gòu)。

GA超組裝反應(yīng)分兩步進行，在兩個連續(xù)步驟中添加兩個主混合物。在第一步中，GA超級大師混合A（2X）通過咀嚼3'端的DNA，產(chǎn)生單鏈DNA 5'懸垂。該反應(yīng)在允許互補重疊區(qū)退火的條件下冷卻。下一步，添加GA Ultra Master Mix B（2X）。在這一步驟中，核苷酸被整合到構(gòu)建物中，以填補退火DNA片段中的空白，而缺口被密封以創(chuàng)建一個相鄰的DNA構(gòu)建物。

Gibson組裝方法允許在幾乎任何載體中插入一個或多個線性雙鏈DNA片段

在不限制性消化的情況下產(chǎn)生無縫質(zhì)粒DNA或BAC克隆

Gibson組裝過程從設(shè)計末端重疊20-40bp的dsDNA片段開始。對于Gibson組裝超反應(yīng)，采用了兩步工藝。首先，DNA片段與2X Gibson Assembly?Ultra Master Mix a.結(jié)合，孵化產(chǎn)生重疊的自由端。酶失活后，反應(yīng)緩慢冷卻至退火重疊端。接下來，添加2X Gibson Assembly?Ultra Master Mix B，以便生成完全密封的結(jié)構(gòu)。這種高效和穩(wěn)健的克隆方法大約需要80分鐘，并產(chǎn)生一個轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化準備，雙鏈，完全連接的DNA結(jié)構(gòu)。

GA超組裝反應(yīng)分兩步進行，在兩個連續(xù)步驟中添加兩個主混合物。在第一步中，GA超級大師混合A（2X）通過咀嚼3'端的DNA，產(chǎn)生單鏈DNA 5'懸垂。該反應(yīng)在允許互補重疊區(qū)退火的條件下冷卻。下一步，添加GA Ultra Master Mix B（2X）。在這一步驟中，核苷酸被整合到構(gòu)建物中，以填補退火DNA片段中的空白，而缺口被密封以創(chuàng)建一個相鄰的DNA構(gòu)建物。

Gibson組裝方法允許在幾乎任何載體中插入一個或多個線性雙鏈DNA片段，而無需依賴兼容的限制性位點。Gibson組裝法明顯快于傳統(tǒng)的基于限制性內(nèi)切酶消化的克隆法，并被證明可以同時克隆小片段和大片段的雙鏈DNA。使用Gibson Assembly?Ultra Master Mix，可以在一根試管中同時克隆一到十五個大小從100 bp到100 kb的插入物，采用高效的兩步反應(yīng)，克隆效率為95%。

訂購信息：可提供支持10或50個反應(yīng)的主混合物。Gibson UItra主混合液包括一瓶GA Ultra Master Mix A（2X）、一瓶GA Ultra Master Mix B（2X）和詳細說明手冊。請注意，本產(chǎn)品不包括Gibson Assembly?HiFi一步法套件中的GA陽性對照品。如果您是Gibson程序集的新手，或者需要驗證的陽性控件進行實驗，則可能需要考慮目錄號GA1200-S、GA1200-10或GA1200-50。