為高通量用戶開發(fā)并設(shè)計用于BAC或fosmid DNA制備的illustra Tempiphi大型構(gòu)建試劑盒使用等溫滾圈擴(kuò)增（RCA）從大型DNA載體（fosmid和BAC）制備DNA測序模板。[

生成5μg總DNA、1-10 ng純化BAC或fosmid DNA；甘油儲備或細(xì)菌培養(yǎng)簡化過程，在18小時內(nèi)完成20分鐘的手控時間擴(kuò)增，無需熱循環(huán)，為制備BAC或fosmid DNA測序模板，開發(fā)了一種重復(fù)性好、自動化程度高的模板大結(jié)構(gòu)DNA擴(kuò)增試劑盒（TempliPhi-LC試劑盒）。模板法利用噬菌體Phi29 DNA聚合酶酶通過滾圈擴(kuò)增（RCA）對單鏈或雙鏈環(huán)狀DNA模板進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。這種等溫擴(kuò)增方法在幾個小時內(nèi)從picgram量的起始物質(zhì)中產(chǎn)生微克量的DNA。極少量模板DNA的體外擴(kuò)增消除了隔夜細(xì)胞培養(yǎng)和傳統(tǒng)質(zhì)?；騇13 DNA純化的需要。Phi29 DNA聚合酶的校對活性確保了DNA復(fù)制的高保真性。

擴(kuò)增的起始材料可以是少量含有BAC或fosmid DNA的細(xì)菌細(xì)胞，或者任何環(huán)狀DNA樣本。細(xì)菌菌落可以從瓊脂平板上提取，直接加入到模板反應(yīng)中。或者，每毫升的飽

為高通量用戶開發(fā)并設(shè)計用于BAC或fosmid DNA制備的illustra Tempiphi大型構(gòu)建試劑盒使用等溫滾圈擴(kuò)增（RCA）從大型DNA載體（fosmid和BAC）制備DNA測序模板。[

生成5μg總DNA、1-10 ng純化BAC或fosmid DNA；甘油儲備或細(xì)菌培養(yǎng)簡化過程，在18小時內(nèi)完成20分鐘的手控時間擴(kuò)增，無需熱循環(huán)，為制備BAC或fosmid DNA測序模板，開發(fā)了一種重復(fù)性好、自動化程度高的模板大結(jié)構(gòu)DNA擴(kuò)增試劑盒（TempliPhi-LC試劑盒）。模板法利用噬菌體Phi29 DNA聚合酶酶通過滾圈擴(kuò)增（RCA）對單鏈或雙鏈環(huán)狀DNA模板進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。這種等溫擴(kuò)增方法在幾個小時內(nèi)從picgram量的起始物質(zhì)中產(chǎn)生微克量的DNA。極少量模板DNA的體外擴(kuò)增消除了隔夜細(xì)胞培養(yǎng)和傳統(tǒng)質(zhì)粒或M13 DNA純化的需要。Phi29 DNA聚合酶的校對活性確保了DNA復(fù)制的高保真性。

擴(kuò)增的起始材料可以是少量含有BAC或fosmid DNA的細(xì)菌細(xì)胞，或者任何環(huán)狀DNA樣本。細(xì)菌菌落可以從瓊脂平板上提取，直接加入到模板反應(yīng)中。或者，每毫升的飽和細(xì)菌培養(yǎng)物或甘油儲備可以作為起始材料。無論起始材料的來源如何，放大在30℃下在18小時內(nèi)完成，無需熱循環(huán)。模板大分子結(jié)構(gòu)反應(yīng)的產(chǎn)物是高分子量、雙鏈的環(huán)狀模板縮合物。TempliPhi大結(jié)構(gòu)產(chǎn)物是雙鏈DNA，可以用正向和反向引物進(jìn)行測序。用模板大結(jié)構(gòu)擴(kuò)增法擴(kuò)增的DNA可直接用于循環(huán)測序反應(yīng)，無需任何純化。

將試劑盒儲存在-70°C下。酶混合物必須儲存在-70°C下；所有其他成分可儲存在-20°C下。

從微升量的純化模板以及細(xì)菌培養(yǎng)物或甘油儲備開始。