免疫共沉淀服務(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)

服務項目簡介

免疫共沉淀（Co- Immunoprecipitation, Co-IP）是利用抗原和抗體的te異性結(jié)合以及細菌的Protein A或Gte異性地結(jié)合到免疫

球蛋白的Fc片段的現(xiàn)象開發(fā)出來的方法。其基本原理是，在細胞裂解液中加入抗興趣蛋白的抗體，孵育后再加入與抗體te異結(jié)合的

結(jié)合于Agarose珠上的Protein A或G，若細胞中有與興趣蛋白結(jié)合的目的蛋白，就可以形成這樣一種復合物：“目的蛋白—興趣蛋

白—抗興趣蛋白抗體—Protein A或G”，經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，復合物又被分開。然后經(jīng)免疫印跡或質(zhì)譜檢測目的蛋白。這

種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實際情況，得到的結(jié)果可信度高。

技術(shù)步驟

（1）轉(zhuǎn)染后24~48 h 收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30 min, 細胞裂解液于4 °C， 大轉(zhuǎn)

速離心30 min后取上清；

（2）取少量裂解液以備免疫印跡分析，剩余裂解液中加入適量的相應抗體，4 °C緩慢搖晃孵育過夜；

（3）取10μL protein A 或G瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3次，每次3,000 rpm離心3 min；

（4）將預處理過的10 μl protein A 或G瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4 °C緩慢搖晃孵育2~4 h，使抗體與

protein A或G瓊脂糖珠偶聯(lián)；

（5）免疫沉淀反應后，在4 °C 以3,000 rpm 速度離心3 min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1mL裂解緩

沖液洗3－4次；后加入15 μL的3×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；

（6）SDS-PAGE, 免疫印跡或質(zhì)譜儀分析。

應用領(lǐng)域

研究細胞內(nèi)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的一種技術(shù)。

服務周期

接到樣本后1個月左右。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

（1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內(nèi)存在的ALL蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP-40或Triton

X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2％ SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑

，如商品化的cocktail。

（2）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；

（3）兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有弟三者在中間起橋梁作用；

（4）必須在實驗前預測目的蛋白是什么，以選擇后檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結(jié)果，方法本身具有一定風險。

服務咨詢及技術(shù)支持