文庫構(gòu)建服務(wù)

世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心提供文庫構(gòu)建服務(wù)。世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心提供的文庫構(gòu)建服務(wù)包括cDNA文庫構(gòu)建和基因組DNA文庫構(gòu)建，cDNA文庫來源于

細(xì)胞表達(dá)出的RNA，反映基因組表達(dá)的基因序列信息，用于研究te定細(xì)胞中基因的表達(dá)狀態(tài)和表達(dá)基因的功能等；基因組DNA文庫來

源于基因組DNA，反映基因組的部信息，用于基因組物理圖譜的構(gòu)建，基因組序列分析，基因在染色體上的定位，基因組中基因的

結(jié)構(gòu)和組織形式等。世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心將會為您在文庫構(gòu)建服務(wù)方面提供方位，性價比高的解決方案。

收費標(biāo)準(zhǔn)

服務(wù)周期

實驗周期一般為得到合格的Total RNA后30~45個工作日。如有te殊情況我們與客戶及時聯(lián)系反饋意見。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

1. 客戶須在實驗開始前確保其提供材料的數(shù)量和質(zhì)量，并提供相關(guān)信息。
2. 客戶需提供盡量多的新鮮樣品 （動物樣品量大于5 g；植物樣品量大于20 g；各種培養(yǎng)細(xì)胞提供5×107以上培養(yǎng)好的細(xì)胞)，樣品4 ℃保存不超過一天，或?qū)⑿迈r樣品立即存于液氮或-80℃后保存不超過一個星期。
3. 可直接提供Total RNA或基因組DNA，要保證沒有降解，要求總RNA＞500ug，濃度＞1ug/ul；mRNA＞3ug，濃度＞50ng/ul；OD260/OD280值≥1.8，以我公司電泳膠圖、紫外分析儀定量檢測為準(zhǔn)。
4. 建議由我方提取RNA或基因組DNA；如果客戶提供RNA樣品或基因組DNA，由樣品質(zhì)量產(chǎn)生的任何問題，其損失和責(zé)任應(yīng)由樣品提供方承擔(dān)。

服務(wù)程序

1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《文庫構(gòu)建服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3. 可電話聯(lián)系詳談有關(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。

4. 簽訂《文庫構(gòu)建服務(wù)合同》，預(yù)付實驗總費用的50%作為實驗預(yù)付款。

5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸

，以確保實驗物品的安可靠。

6. 實驗結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：

產(chǎn)物電泳圖譜；
cDNA初始庫/基因組DNA文庫，保存在-20 ℃；
文庫評價數(shù)據(jù)，包括庫容量，插入片段平均長度，重組效率，cDNA完整性評價等；
實驗報告（包括實驗流程，材料和方法等）。

7. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持

電話:

服務(wù)項目簡介

1. 普通cDNA文庫（質(zhì)粒文庫、噬菌體文庫）構(gòu)建

用Oligo(dT)或隨機(jī)引物作逆轉(zhuǎn)錄引物，將合成的cDNA連接到適當(dāng)?shù)妮d體中獲得cDNA文庫。

（1）Total RNA的提取和mRNA的純化。

（2）cDNA條鏈的合成。

（3）cDNA弟二條鏈的合成。

（4）雙鏈cDNA的修飾。探針標(biāo)記技術(shù)：標(biāo)記物有放射性和非放射性兩種。非放射性：生物素、地高辛素、熒光素 標(biāo)記方法:切口平

移法、隨機(jī)引物法、末端標(biāo)記法、單鏈DNA探針標(biāo)記、寡核苷酸探針標(biāo)記法。

（5）雙鏈cDNA的分子克隆。

（6）cDNA文庫的擴(kuò)增。

（7）cDNA文庫鑒定評價。

2. 均一化文庫構(gòu)建

均一化cDNA文庫是克服基因轉(zhuǎn)錄水平上巨大差異給文庫篩選和分析帶來障礙的有效措施，有利于研究基因的表達(dá)和序列分析。我們

基于雙鏈te異性核酸酶（Duplex-Specific Nuclease， DSN）的cDNA文庫均一化技術(shù)構(gòu)建均一化cDNA文庫，能減低高豐度表

達(dá)基因100倍以上，有效富集低豐度表達(dá)基因。

文庫特點：無需反復(fù)雜交過程，均一化程度高；均一化后平均插入片斷大小無明顯變化。

3. 長文庫構(gòu)建

利用公司專有技術(shù)，進(jìn)行長文庫構(gòu)建服務(wù)。尤其適合希望獲得高比例長基因的客戶。 文庫特點：不經(jīng)過PCR過程，容易獲得低

豐度基因;長比例高（長比例>80%）；樣品用量大，需要25 mg的mRNA，因此，不適合樣品量少的材料。

4. 基因組DNA文庫構(gòu)建

公司具備構(gòu)建以 puc 19 作為載體的基因組散彈法文庫的成熟技術(shù)，擁有超聲儀、電轉(zhuǎn)儀等配套儀器、有秀的專業(yè)技術(shù)人員，

可以為您提供從總 DNA 提取、隨機(jī)剪切、載體連接、轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增到保存的程服務(wù)。同時，還可以為您作進(jìn)一步的數(shù)據(jù)處理及信息

分析。

技術(shù)原理

cDNA文庫是在te定的組織或細(xì)胞中，以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成的互補DNA（cDNA）與適當(dāng)?shù)妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后

轉(zhuǎn)化受體菌形成重組DNA克隆群，這樣包含著細(xì)胞部mRNA信息去除了內(nèi)含子的cDNA克隆集合稱為該組織或細(xì)胞的cDNA文庫，具有

組織或細(xì)胞te異性。

從YAC(yeast artificial chromosome)庫，或從BAC(bacterial artificial chromosome)庫、PAC(P1 artificial

chromosome)庫中篩選相對應(yīng)的克隆。YAC庫的嵌合性嚴(yán)重且操作難度較大，已逐步為PAC庫和BAC庫取代。PAC系統(tǒng)是以噬菌體P1為

基礎(chǔ)的克隆系統(tǒng)，它可容納70～100 kb的插入片段，并可選擇性地區(qū)分重組子和非重組子，且同時有兩套復(fù)制機(jī)制。單拷貝復(fù)制子

可用于穩(wěn)定克隆增殖，而多拷貝復(fù)制子則可在Lac操縱子的控制下用于DNA的制備。BAC系統(tǒng)是基于大腸桿菌中可大容量容納基因且穩(wěn)

定性良好的F因子衍生而來的載體系統(tǒng)，可容納超過100 kb的插入片段，BAC克隆的插入片段的平均長度為120 kb，大可達(dá)到240

kb左右。良好的穩(wěn)定性和操作的簡便性是BAC系統(tǒng)的主要you點。由這些克隆入手，采用依賴于適當(dāng)cDNA文庫的方法、依賴于特征序列

的方法或依賴于表達(dá)性質(zhì)等方法獲得候選cDNA。

基因組文庫是含有某種生物體部基因的隨機(jī)片段的重組DNA克隆群體。反應(yīng)基因組的部信息，用于基因組物理圖譜的構(gòu)建，基因

組序列分析，基因在染色體上的定位，基因組中基因的結(jié)構(gòu)和組織形式等。我公司利用基因組散彈法文庫的成熟技術(shù)，構(gòu)建基因組

文庫，并保證庫容量和重組率。

應(yīng)用領(lǐng)域

① 基因分離研究

② 個體發(fā)育研究

FAQ

各種文庫構(gòu)建的價格差得比較多，均一化cDNA文庫構(gòu)建是什么技術(shù)？主要是用來做什么的？

我們基于雙鏈te異性核酸酶（Duplex-Specific Nuclease，DSN）的方法來構(gòu)建均一化cDNA文庫，能減低高豐度表達(dá)基因100倍以

上，有效富集低豐度表達(dá)基因。均一化cDNA文庫是克服基因轉(zhuǎn)錄水平上巨大差異給文庫篩選和分析帶來障礙的有效措施，有利于研

究基因的表達(dá)和序列分析。

各種文庫構(gòu)建的載體分別是何種載體？

cDNA文庫構(gòu)建使用的載體很廣泛，除常用質(zhì)粒和λ噬菌體載體外,我公司也可以使用客戶要求或提供的載體構(gòu)建所需cDNA文庫。

構(gòu)建文庫有沒有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)？

cDNA文庫質(zhì)量的評價主要有兩個方面，一個是文庫的代表性，也就是指包含的重組cDNA反應(yīng)來源細(xì)胞中表達(dá)信息的完整性；另一個

是文庫的庫容量，它是指構(gòu)建的原始cDNA文庫中所包含的立的重組子克隆數(shù)。