限制性片段長度多態(tài)性服務(RFLP)

限制性片段長度多態(tài)性分析服務

世聯(lián)博研生命科研服務中心提供限制性片段長度多態(tài)性分析服務。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段

長度多態(tài)性)已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RFLP是根據(jù)不同品種或個體基因組的限制性

內(nèi)切酶的酶切位點堿基發(fā)生突變，或酶切位點之間發(fā)生了堿基的插入、缺失，導致酶切片段大小發(fā)生了變化，這種變化可以通過te

定探針雜交進行檢測，從而可比較不同品種或個體的DNA水平的差異（即多態(tài)性）。世聯(lián)博研生命科研服務中心將會為您在限制性片段長度多態(tài)性分析

服務方面提供方位，性價比高的解決方案。

收費標準

服務周期

我公司在接受實驗委托1~2周內(nèi)完成實驗并交付實驗報告，具體視樣品量而定。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

樣品要求：血液樣品，樣品為EDTA抗凝或枸櫞酸鈉抗凝，樣品量大于0.1 ml，樣品采集后-20或-80 ℃保存。組織樣品，樣品可以

為新鮮組織（好－80℃保存）或石蠟包埋的組織，也可以是95%乙醇中固定的組織，組織量大于50 mg。樣品也可以是細胞、菌液

或其它。此外，客戶還需提供待測定的基因名稱、序列或Gene bank ID。

服務程序

1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《限制性片段長度多態(tài)性分析服務訂單》發(fā)至我公司郵箱�！断拗菩云�段長度多態(tài)性分析服務訂單》下載

2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3. 可電話聯(lián)系詳談有關具體要求和服務內(nèi)容。

4. 簽訂《限制性片段長度多態(tài)性分析服務合同》，預付實驗總費用的50%作為實驗預付款。《限制性片段長度多態(tài)性分析服務合同》下載

5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸

，以確保實驗物品的安可靠。

6. 實驗結束后，本公司將結果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關材料：
DNA電泳圖片；

探針及Southern雜交圖片；

具體實驗方法、步驟、所用試劑、儀器，及相關分析數(shù)據(jù)等，實驗結果將以電子或書面形式提交給您。

7. 客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔。

服務咨詢及技術支持

電話:
Email:

服務項目簡介

DNA分子水平上的多態(tài)性檢測技術是進行基因組研究的基礎。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段長

度多態(tài)性)已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RFLP是根據(jù)不同品種或個體基因組的限制性內(nèi)

切酶的酶切位點堿基發(fā)生突變，或酶切位點之間發(fā)生了堿基的插入、缺失，導致酶切片段大小發(fā)生了變化，這種變化可以通過te定

探針雜交進行檢測，從而可比較不同品種或個體的DNA水平的差異（即多態(tài)性）。

所用的探針為來源于同種或不同種基因組DNA的克隆，位于染色體的不同位點，從而可以作為一種分子標記，構建分子圖譜。當某個

性狀與某個分子標記協(xié)同分離時，表明這個性狀與分子標記連鎖。分子標記與性狀之間交換值的大小，即表示目標基因與分子標記

之間的距離，從而可將基因定位于分子圖譜上。不同限制性內(nèi)切酶切割基因組DNA后，所切的片段類型不一樣，因此，限制性內(nèi)切酶

與分子標記組成不同組合進行研究。常用的限制性內(nèi)切酶一般是Hind III，BamH I，EcoR I，EcoR V，Xba I，而分子標記則有幾

個甚至上千個。

參考技術步驟

1. 基因組DNA的酶解

（1）大片斷DNA的提取詳見基因組DNA提取實驗，要求提取的DNA分子量大于50 kb，沒有降解。

（2）在50 μl反應體系中，進行酶切反應:

5 μg基因組DNA

5 μl 10×酶切緩沖液

20單位（U）限制酶

加ddH2O, 至50 μl

(3) 輕微振蕩，離心，37 ℃反應過夜。

(4) 取5 μl反應液，0.8％瓊脂糖電泳觀察酶切是否徹底，這時不應有大于30 kb的明顯亮帶出現(xiàn)。

[注意] 未酶切的DNA要防止發(fā)生降解，酶切反應一定要徹底。

2. Southern轉移

（1） 酶解的DNA經(jīng)0.8％瓊脂糖凝膠電泳(可18 V過夜)后EB染色觀察。

　　
（2） 將凝膠塊浸沒于0.25 mol/L HCl中脫嘌呤，10分鐘。 　　

（3） 取出膠塊, 蒸餾水漂洗, 轉至變性液變性45分鐘。經(jīng)蒸餾水漂洗后轉至中和液中和30分鐘。

（4） 預先將尼龍膜和濾紙浸入水中，再浸入10×SSC中,將一玻璃板架于盆中鋪一層濾紙(橋)然后將膠塊反轉放置，蓋上尼龍膜，

上覆二層濾紙，再加蓋吸水紙，壓上半公斤重物, 以10×SSC鹽溶液吸印，維持18-24小時。也可用電轉移或真空轉移。

（5） 取下尼龍膜，0.4 mol/L NaOH 30秒, 迅速轉至0.2 mol/L TrisHCl，pH7.5/2×SSC溶液中，5分鐘。

（6） 將膜夾于2層濾紙內(nèi)，80℃真空干燥2小時。

（7） 探針的制備和雜交。

[注意]

a. 步驟（2）中脫嘌呤時間不能過長。

b .除步驟（1）、（4）、（5）外, 其余均在搖床上進行操作。

c. 步驟（4）中，當尼龍膜覆于膠上時，絕對防止膠與膜之間有氣泡發(fā)生。

d. 有時用一種限制性內(nèi)切酶不能發(fā)現(xiàn)RFLP的差異，這時應該試用另一種酶。