RNA干擾服務(wù)(RNAi)-RNA干擾載體構(gòu)建

RNA干擾服務(wù)（RNAi）

世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心提供RNA干擾服務(wù)（RNAi）。RNA干擾（RNA interfering）現(xiàn)象是由與靶基因序列同源的雙鏈RNA引發(fā)的廣泛存在于生物體內(nèi)的序列te異性基因轉(zhuǎn)錄后的沉默過程。由于RNAi具有高度的序列專一性，可以te異地將te定的基因沉默，從而獲得基因基因功能喪失或基因表達(dá)量的降低。因此可以作為功能基因組學(xué)研究的一種強(qiáng)有力的工具。RNAi技術(shù)可以廣泛應(yīng)用到包括功能學(xué)，藥物靶點(diǎn)篩選，細(xì)胞新華傳導(dǎo)通路分析，疾病治療等。

服務(wù)內(nèi)容

RNAi服務(wù)包括以下兩個(gè)方面：

（1）化學(xué)合成RNAi服務(wù)

①RNAi雙鏈設(shè)計(jì)：客戶需要與我們共同討論實(shí)驗(yàn)方案，并提供靶基因的名稱、序列或GeneBank ID等

②siRNA合成

③根據(jù)客戶要求可進(jìn)一步轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞 ④檢測抑制效果：熒光定量PCR檢測mRNA表達(dá)情況、Western Blot檢測蛋白表達(dá)情況 ⑤提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告：siRNA序列、構(gòu)建載體的測序報(bào)告；熒光定量PCR檢測報(bào)告、Western Blot圖片等

（2）載體介導(dǎo)的RNAi服務(wù)

①shRNA設(shè)計(jì)：客戶需要與我們共同討論實(shí)驗(yàn)方案，并提供靶基因名稱、序列或GeneBank ID等

②shRNA構(gòu)建

③shRNA載體的選擇，提供pGPU6/GFP/Neo、pGPH1/GFP/Neo等多種載體

④根據(jù)客戶要求可進(jìn)一步轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞 ⑤檢測抑制效果：熒光定量PCR檢測mRNA表達(dá)情況、Western Blot檢測蛋白表達(dá)情況

⑥提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告：shRNA序列、構(gòu)建載體的測序報(bào)告；熒光定量PCR檢測報(bào)告、Western Blot圖片等

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

服務(wù)周期

一般為4周左右，具體視實(shí)驗(yàn)情況而定。

客戶須知（對材料的要求、注意事項(xiàng)）

客戶需要提供RNA干擾的目的基因的名稱、序列或Gene Bank號，并與我們共同討論實(shí)驗(yàn)方案。

服務(wù)程序

1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《RNA干擾服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3. 可電話聯(lián)系詳談有關(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。

4. 簽訂《RNA干擾服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗(yàn)總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗(yàn)預(yù)付款。

5. 寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗(yàn)物品的安可靠。

6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：

siRNA/shRNA序列；

構(gòu)建的載體以及測序報(bào)告；

熒光定量PCR檢測報(bào)告/Western blot檢測報(bào)告等；

具體實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器，及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等，實(shí)驗(yàn)結(jié)果將以電子或書面形式提交給您。

7. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

服務(wù)項(xiàng)目簡介

RNA干擾(RNA interference, RNAi)是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA, dsRNA)誘發(fā)的、同源mRNA高效te異性降解的現(xiàn)象。RNAi的作用提供了一種經(jīng)濟(jì)、快捷、高效的抑制te異基因表達(dá)的技術(shù)手段，有助于研究該基因在生物模型系統(tǒng)中的作用，是研究基因功能的重要工具，并且逐步成為病毒性疾病、遺傳性疾病以及腫瘤等的基因治療研究的一種手段�？捎糜诠δ芑�因組學(xué)、基因治療、藥物靶標(biāo)篩選、細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路分析、蛋白質(zhì)相互作用等研究。世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心RNAi服務(wù)團(tuán)隊(duì)擁有專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，能夠幫助客戶大化實(shí)現(xiàn)RNAi技術(shù)應(yīng)有的價(jià)值，避免一些實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤。我們的研究隊(duì)伍將和您一起設(shè)計(jì)更加廣泛有效的RNAi解決方案。

應(yīng)用領(lǐng)域

① 基因功能的研究

② 疾病的基因治療

③ 蛋白質(zhì)功能的研究

FAQ:

公司每個(gè)基因敲除共設(shè)計(jì)幾個(gè)干擾siRNA/shRNA？

3個(gè)

敲除服務(wù)結(jié)束后，公司是否提供構(gòu)建好的，能成功敲除的siRNA或者shRNA克��？

提供

是否保證敲除成功，不成功不收費(fèi)？

我們保證實(shí)驗(yàn)不成功不收費(fèi)

RNAi干擾服務(wù)中，干擾的效率一般有多少？

干擾的效率一般能達(dá)到70%

我們需要提供什么信息用于siRNA的合成？你們可以幫助免費(fèi)設(shè)計(jì)嗎？我們可以為您免費(fèi)設(shè)計(jì)并合成siRNA

你們提供的siRNA是怎樣裝運(yùn)的？如果在常溫下放置了一個(gè)星期，還有效嗎？我們提供的siRNA為干粉，可以常溫運(yùn)輸，但要注意不能受RNA酶降解

使用RT-PCR檢測基因knockdown結(jié)果，之前應(yīng)該注意哪些問題？

要注意以下幾點(diǎn)問題：

1、我們RT-PCR的引物應(yīng)該設(shè)計(jì)在target位置的兩側(cè)，而不是同側(cè)。目前已經(jīng)知道的siRNA介導(dǎo)的基因knockdown機(jī)制是RSIC先介導(dǎo)靶mRNA的切割，切割導(dǎo)致靶mRNA的降解，由于切割和降解可能具有不同的時(shí)間點(diǎn)，因此，設(shè)計(jì)于同側(cè)的PCR引物可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果或knockdown效率的低估。

2、另外，RT-PCR結(jié)果會因?yàn)榘谢�因mRNA降解時(shí)間不同、細(xì)胞內(nèi)靶基因mRNA豐度不同而導(dǎo)致假陰性結(jié)果，te別對于豐度較高的基因，使用的檢測方式包括定量PCR、Northern檢測、western檢測等。這些方法會更加真實(shí)的反映RNAi的結(jié)果。