自噬是公認的細胞內(nèi)廢物降解的基本機制，細胞內(nèi)自噬小體隔離多余、老化或受損的細胞質(zhì)并將其輸送至溶酶體降解。正常情況下，自噬小體與溶酶體融合形成自噬溶酶體進而降解清除底物，當自噬流受阻時，未被溶酶體降解的自噬小體蓄積，其去向目前仍不明確。

為了探討CD137-CD137配體（CD137L）信號通路是否通過Rab7分子調(diào)控自噬從而影響小鼠血管平滑肌細胞（VSMC）外泌體的分泌， 江蘇大學附屬醫(yī)院何陽， 崔星剛， 李波， 等人采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)C57BL/6J小鼠胸主動脈平滑肌細胞，取分離培養(yǎng)的第3~5代的VSMC進行實驗。實驗分為4組，即對照組、CD137激動組（采用10 μg/ml的CD137L重組蛋白激動CD137-CD137L信號通路）、慢病毒對照組（在CD137L重組蛋白干預的基礎上加對照干擾慢病毒干預）和Rab7慢病毒干擾組（在CD137L重組蛋白干預的基礎上加Rab7干擾慢病毒干預）。Western blot法檢測各組VSMC微管相關蛋白1輕鏈3（LC3Ⅱ）、p62和Rab7的蛋白表達。自噬雙標腺病毒（mRFP-GFP-LC3）熒光顯微鏡下觀察各組VSMC自噬流的變化。透射電鏡下觀察VSMC來源外泌體的形態(tài)及大小，Western blot法檢測外泌體標記物CD9、CD81和熱激同源蛋白70（Hsc70）以及自噬相關蛋白LC3Ⅱ的表達，納米顆粒跟蹤分析（NTA）技術(shù)檢測各組VSMC分泌的外泌體的濃度。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)：各組VSMC中Rab7、LC3Ⅱ和P62的蛋白表達水平：CD137激動組VSMC中Rab7、LC3Ⅱ和p62蛋白表達水平均明顯高于對照組（P均<0.05）。Rab7慢病毒干擾組VSMC中Rab7、LC3Ⅱ和p62蛋白表達均低于CD137激動組（P均<0.05）。慢病毒對照組VSMC中Rab7、LC3Ⅱ和p62蛋白表達與CD137激動組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P均>0.05）。各組VSMC自噬流的變化：CD137激動組VSMC內(nèi)熒光斑點總數(shù)和黃色熒光點數(shù)均多于對照組（P均<0.05），且CD137激動組VSMC內(nèi)黃色熒光點數(shù)多于紅色[分別為（50.3±0.9）和（10.3±1.5）個/細胞]。而Rab7慢病毒干擾組VSMC內(nèi)熒光斑點總數(shù)和黃色熒光點數(shù)均少于CD137激動組（P均<0.05），且Rab7慢病毒干擾組VSMC內(nèi)紅色熒光斑點數(shù)多于黃色[分別為（40.7±4.0）和（10.7±1.2）個/細胞]。慢病毒對照組VSMC內(nèi)熒光斑點總數(shù)和黃色熒光點數(shù)與CD137激動組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P均>0.05）。

小鼠VSMC來源的外泌體的鑒定、外泌體標記物CD9、CD81的表達以及各組VSMC外泌體濃度和自噬相關蛋白LC3Ⅱ的表達：透射電子顯微鏡下觀察，分離和純化的小鼠VSMC分泌的外泌體為直徑30~150 nm的囊泡狀結(jié)構(gòu)。Western blot結(jié)果顯示，在純化的外泌體中檢測到外泌體標記物CD9、CD81蛋白的高表達。NTA技術(shù)檢測結(jié)果示，CD137激動組VSMC外泌體濃度明顯高于對照組（P<0.05）；Rab7慢病毒干擾組VSMC外泌體濃度明顯低于CD137激動組（P<0.05）；慢病毒對照組VSMC外泌體濃度與CD137激動組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。CD137激動組VSMC外泌體中Hsc70蛋白表達高于對照組（P<0.05）；Rab7慢病毒干擾組VSMC外泌體中Hsc70蛋白表達低于CD137激動組（P<0.05）；慢病毒對照組VSMC外泌體中Hsc70蛋白表達水平與CD137激動組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。CD137激動組VSMC外泌體中LC3Ⅱ的表達水平高于對照組（P<0.05），Rab7慢病毒干擾組低于CD137激動組（P<0.05），慢病毒對照組與CD137激動組比較差異則無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

CD137-CD137L信號通路可能通過Rab7分子調(diào)控自噬進而影響小鼠血管平滑肌細胞外泌體的分泌。(世聯(lián)博研(Bioexcellence)世聯(lián)博研Bioexcellence）

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