酵母雙雜交系統(tǒng)服務 yeast two-hybrid system

酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeast two-hybrid system)的建立是基于對真核生物調(diào)控轉錄起始過程的認識。細胞起始基因轉錄需要有反式轉

錄激活因子的參與。反式轉錄激活因子，例如酵母轉錄因子 GAL4在結構上是組件式的（modular），往往由兩個或兩個以上結構上

可以分開，功能上相互立的結構域（domain）構成，其中有DNA結合功能域(DNA binding domain, DNA-BD)和轉錄激活結構域（

activation domain，DNA-AD）。這兩個結合域?qū)⑺鼈兎珠_時仍分別具有功能，但不能激活轉錄，只有當被分開的兩者通過適當?shù)?/p>

途徑在空間上較為接近時，才能重新呈現(xiàn)完整的GAL4轉錄因子活性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence,

UAS）的下游啟動子，使啟動子下游基因得到轉錄。

在酵母雙雜交系統(tǒng)中，“誘餌”蛋白X克隆至DNA-BD載體中，表達DNA-BD/X融合蛋白；待測試蛋白Y克隆至AD載體中，表達AD/Y融合

蛋白。一旦X與Y蛋白間有相互作用，則DNA-BD和AD也隨之被牽拉靠近，恢復行使功能，激活報告重組體中LacZ和HIS3基因的表達。

技術步驟

（1）將待測基因與Gal4或LexA或其他合適蛋白的DNA結合域融合構建誘餌質(zhì)粒；

（2）將誘餌質(zhì)粒轉化缺乏報告基因啟動子的酵母細胞株中，選擇被轉化的酵母；

（3）再將文庫質(zhì)粒轉化到酵母中；

（4）通過報告基因的功能篩選相互作用的蛋白。

應用領域

（1）利用酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)的新功能；

（2）利用酵母雙雜交在細胞體內(nèi)研究抗原和抗體的相互作用；

（3）利用酵母雙雜交篩選藥物的作用位點以及藥物對蛋白質(zhì)之間相互作用的影響

服務周期

1) 酵母雙雜交建庫

為客戶構建指定的酵母雙雜交基因文庫。由客戶提供cDNA 或組織、細胞。

技術服務內(nèi)容包括：總RNA提取、純化，mRNA分離，cDNA制備，cDNA連接AD載體，連接產(chǎn)物轉化大腸桿菌，cDNA文庫效價測定，

cDNA文庫擴增等內(nèi)容。

服務完成時提供兩種形式的文庫：(1)該文庫轉化的大腸桿菌甘油凍存管；(2)從該文庫擴增的DNA。

周期：2~3個月。

2) 酵母雙雜交文庫篩選

為客戶對指定的基因文庫進行酵母雙雜交篩選。由客戶提供誘餌基因和基因文庫。

周期：3個月。篩選完成后向客戶提供詳細的篩選報告和陽性克隆實物。

3) 為客戶對指定的2個或多個基因之間進行酵母雙雜交實驗。由客戶提供基因克隆

周期：1個月。實驗完成后向客戶提供詳細的實驗報告和相互作用陽性的酵母共轉化菌株。

服務咨詢及技術支持

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